高效液相色谱对豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄的测定
- 发布者：华通泵业
- 发布时间：2013-09-03
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【华通砂砾泵】摘要：本文探讨高效液相色谱法测定豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄含量的方法，豆制品中酸性金黄Ⅱ经粉碎，提取，过滤，得到的样品提取液用高效液相色谱测定，流动相是甲醇乙酸铵0.02 mol/L=75 25，在检测波长450 nm时，流速1.0 ml/min测定，色谱柱为SymmetryC18。
豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄是在医学中应用于组织染色，木制家具、毛线、布料等的着色剂，但不法商贩利用其颜色鲜艳、着色稳定、价廉的特点非法添加于豆制品中，严重危害了广大消费者的身体健康［1］，国家尚无相应的检验标准方法，本文初步建立了用高效液相色谱法测定酸性橙Ⅱ和酸性金黄的方法，该方法能快速、准确、简便的检出酸性橙Ⅱ和酸性金黄，能满足食品检验的需要。
1试验部分1.1仪器和试剂1.1.1仪器高效液相色谱仪包括Waters1525型泵，2487型紫外检测器，Breeze色谱工作站及手动进样器。
1.1.2标准品酸性橙Ⅱ（纯度86%）和酸性金黄（工业用纯度90%）。
1.1.3甲醇色谱纯。
1.1.4纯水由AKUPⅡI20型纯水机提供的高纯水。
1.1.5 0.02 mol/L乙酸铵溶液，pH=4.7。
1.1.6碱性提取液无水乙醇∶氨水∶水=70∶20∶10。
1.2色谱条件色谱柱为SymmetryC18（250 mm×4.6 mmid，5 μm）流动相甲醇：0.02 mol/L乙酸铵溶液=75 25，溶液流速1.0 ml/min，柱温为常温，检测波长450 nm，进样量20 μl。
1.3标准品的制备吸取混合标准储备液1.00 mg/ml适量，配成系列浓度为0，0.01 μg/ml，0.05 μg/ml，0.10 μg/ml，0.50 μg/ml，1.00 μg/ml的标准系列。
1.4样品前处理称取混匀粉碎的样品5.00 g~10.00 g于100 ml烧杯，加pH=6的水50 ml，混匀，过滤，滤液加入1.00 g聚酰胺粉用，G3漏斗抽滤，pH=6的水冲洗2次~3次，碱性提取液解吸2次~3次，每次5 ml，收集解吸液，水浴挥干，将残渣用蒸馏水溶解，定容至5 ml，然后过0.45 μm滤膜。标准和样品滤液注入HPLC系统，按上述色谱条件测定。以保留时间定性，峰面积定量。
2结果2.1波长选定用流动相稀释标准溶液，进行紫外扫描，由扫描图谱可知，酸性Ⅱ和酸性金黄在450 nm有较大吸收，所以我们选取450 nm为检测波长。
2.2工作曲线与检测限以工作液含量X对色谱峰面积Y进行线形回归，其结果表明，酸性橙Ⅱ和酸性金黄在0.11 μg/ml~1.00 μg/ml范围内线性关系（Linear range）良好。回归方程（Regression equation），线性范围，相关系数（Correlation coefficient）及检测限（Detection limit）（S/N=3）见表1。表1标准曲线及检出限项目（略）
2.3标准图谱及样品图谱如下（见图1和图2）。
2.4方法精密度（n=6）
配制含酸性橙Ⅱ（纯度86%）和酸性金黄0.05 μg/ml的样品，注入HPLC系统按上述色谱条件六次测定（见表2），结果表明，该方法有较好的精密度（RSD分别为2.06%，1.18%）。表2精密度测定次数（略）
3讨论本文对高效液相色谱法测定酸性橙Ⅱ和酸性金黄进行了初步探讨，认识还比较肤浅，此方法还有待进一步完善。
（本文编辑 华通泵业砂砾泵 www.huatongby.com）